在做蛋白纯化的时候,失败总是难免的,要么蛋白无法表达,要么表达的蛋白检测不到,还有就是蛋白无法挂柱……为了更好的帮助大家在蛋白纯化领域一步到位,之前写过一篇文章帮大家分析在哺乳动物表达系统中,亲和标签该如何选择:

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其中 Strep-tag® 标签(包含 Strep-tag®II 或是 Twin-Strep-tag®)搭配的Strep-tag® 纯化系统,纯化过程温和、目标蛋白纯度高,且相容于多种表达系统的特性,越发受到科研人员的欢迎。

优势原理

第三代 Strep-tag®蛋白纯化系统,由 Twin-Strep-tag®标签搭配 Strep-Tactin®XT 组合而成,相比于之前一代(Strep-tag®II:Strep-Tactin®),亲和力接近共价,但连结仍为可逆,因此在温和的纯化流程中可以产出高纯度(纯度 > 95%)、高产量的目标蛋白,且能保持目标蛋白活性。不仅如此,此系统在有表面活性剂的环境中仍有良好的纯化表现,并且多次清洗柱子也不会造成目标蛋白流失, 即使是量少的蛋白或是膜蛋白,也有良好的纯化效率。

应用案例

在研究实例中,文章作者使用了 Strep-Tag®系统成功的重组表达和纯化了乳胶清除蛋白(Latex Clearing Proteins, Lcps)1。 Lcp 是一种橡胶加氧酶,是仅有的被研究和生化表征的三种胞外橡胶加氧酶之一2,可被革兰氏阳性链霉菌属 K30(LcpK30)利用,在天然橡胶上生长。由于天然橡胶作为日用品被广泛的使用,如密封袋,手套和轮胎等,产生的废弃物也因此永久的进入了环境之中。其主要成分顺-1,4 聚异戊二烯,可以被加氧酶裂解,反应生成的末端有醛、酮基的低聚类异戊二烯,可作为生物燃料或精细化学品的合成前体3。因此对橡胶加氧酶进行研究,具有十分重要的意义。

下面我们对比一下 Strep-tag®II- LcpK30分别搭配 Strep-Tactin®high capacity 与 Strep-Tactin®XT 的纯化效果。

以 SDS-PAGE 分析发现(图 2),使用 Strep-Tactin®high capacity 与 Strep-Tactin®XT,均能得到大量高纯度的蛋白;相对而言,使用 Strep-Tactin®high capacity 在洗脱最后一步时会流失少量蛋白。而使用 Strep-Tactin®XT 则能避免蛋白的流失。因此,使用两种树脂的蛋白质得率是不同的(图 3)。与 Strep-Tactin®high capacity 相比,Strep-Tactin®XT 可以多纯化出约 13% 的 Strep-Tag®II-LcpK30,效率更高,价格更低。

与二代 Strep-Tactin®相比,由于三代 Strep-Tactin®XT 与 Strep-Tag®II 有较高亲和力,可以让更强烈的洗涤步骤得以进行,同时不会损失目标蛋白。因此,Strep-Tactin®XT 可在生理条件下获得极高的蛋白质纯度,其高亲和力可以快速大量的纯化 Strep-Tag®II-LcpK30,温和的洗脱条件又可以保持酶活性,为其三维晶体结构的成功测定提供了保障4。

不仅如此,Strep-Tactin®XT 还可用于变性条件下的纯化,或 WB/ELISA,侦测目标蛋白,还可用来固定目标蛋白,检测蛋白质交互作用,或是更进一步用以筛选治疗用蛋白质,工业用酵素等等,具有广泛的应用领域。

看完这些内心是不是已经蠢蠢欲动?心动不如行动,点击文末「阅读原文」,快来体验 Strep-Tactin®XT 吧!

参考文献(向下滚动)

1. Röther W, Birke J, Grond S, et al. Production of functionalized oligo-isoprenoids by enzymatic cleavage of rubber. Microb Biotechnol 43: 1238–1433[J]. 2017.

2. Birke J, Röther W, Jendrossek D. RoxB is a novel type of rubber oxygenase that combines properties of rubber oxygenase RoxA and latex clearing protein (Lcp)[J]. Applied and environmental microbiology, 2017: AEM. 00721-17.

3.Birke J, Röther W, Schmitt G, et al. Functional identification of rubber oxygenase (RoxA) in soil and marine myxobacteria[J]. Applied and environmental microbiology, 2013: AEM. 02194-13.

4. Birke J, Röther W, Jendrossek D. Latex clearing protein (Lcp) of Streptomyces sp. K30 is a b-type cytochrome and differs from rubber oxygenase A (RoxA) in its biophysical properties[J]. Applied and environmental microbiology, 2015: AEM. 00275-15.

文章来源:iba

图片来源:iba

题图来源:站酷海洛